附件10
食油中苯（a）芘快速检测
胶体金免疫层析法
(KJ201910)
1 范围
方法规定食油中苯（a）芘胶体金免疫层析快速检测方法
方法适食油中苯（a）芘快速测定
2 原理
方法采竞争抑制免疫层析原理样品中苯（a）芘提取胶体金标记特异性抗体结合抑制抗体试纸条检测卡中检测线（T线）抗原结合导致检测线颜色深浅变化通检测线控制线（C线）颜色深浅较样品中苯（a）芘进行定性判定
3 试剂材料
规定外方法试剂均分析纯水GBT 6682规定二级水
31 试剂
311 正烷：色谱纯
312 乙腈：色谱纯
313 二甲基亚砜（DMSO）
314 NaH2PO4•2H2O
315 Na2HPO4•12H2O
316 氯化钠
317 吐温20
318 氢氧化钠溶液（2 molL）：称取80g氢氧化钠水溶解定容1L
319 PBST溶液：称取02965 g NaH2PO4•2H2O29 g Na2HPO4•12H2O876 g氯化钠055 g吐温20水溶解定容1 L
32 参考物质
苯（a）芘参考物质中文名称英文名称CAS登录号分子式相分子质量见表1纯度均≥95
表1 苯（a）芘参考物质中文名称英文名称CAS登录号分子式相分子质量
中文名称
英文名称
CAS登录号
分子式
相分子质量
苯（a）芘
Benzo(a)pyrene
50328
C20H12
25232
注：等溯源物质
33 标准溶液配制
苯（a）芘标准储备液（01 mgmL）：精密称取适量苯（a）芘标准品（32）置10 mL容量瓶中乙腈（312）溶解稀释刻度摇匀制成浓度01 mgmL苯（a）芘标准储备液直接购买苯（a）芘标准储备液0 ℃~5 ℃避光保存备效期1年
34 材料
苯（a）芘胶体金免疫层析试剂盒适基质食油
341金标微孔（含胶体金标记特异性抗体）
342 试纸条检测卡
4 仪器设备
41 移液器：100 µL1 mL5 mL10 mL
42 涡旋混合器
43 离心机：转速≥4000 rmin
44 电子天：感量001 g
45 氮吹仪空气吹干仪（带温度控制）
5 分析步骤
51 试样制备
取适量代表性样品充分混匀
52 试样提取净化脂
称取10 g油样离心中加入5 mL 正烷（311）15 mL DMSO（313）混合均匀漩涡振荡2min然4000 rmin离心2 min弃层正烷层加入5 mL 正烷（311）漩涡振荡30 s然4000 rmin离心30 s弃层正烷层加入10 mL 氢氧化钠溶液（2 molL）（318）15 mL正烷（311）漩涡振荡30s然4000 rmin离心30 s吸取层正烷层15 mL离心4000 rmin离心2 min取全部正烷层氮吹中50℃氮吹空气吹10 min吹干加入200μL DMSO（313）复溶混合均匀测液
53 测定步骤
开试纸筒取出需数量红色反应微孔（取出微孔立盖桶盖防受潮）微孔中加入200 μLPBST溶液加入50 μL测液抽吸5~10次微孔试剂混合均匀室温（20℃~25℃）反应7 min已做标记试纸条插入述红色微孔中样品垫充分进
入样品中计时7 min微孔中取出试纸条弃试纸条端样品垫进行结果判定
54 质控试验
批样品应时进行空白试验加标质控试验
541 空白试验
称取空白试样5253步骤样品法操作
542 加标质控试验
准确称取空白试样（精确001 g）置玻璃试剂瓶中加入定体积苯（a）芘标准储备液（01 mgmL）（331）试样中苯（a）芘浓度10 μgkg5253步骤样品法操作
6 结果判定方式
长时间放置会引起质控线（C线）检测线（T线）颜色变化需规定时间进行结果判定试纸条检测卡图1示结果判定根产品说明书进行
61 读数仪测定结果
通读数仪结果进行判读根厂家仪器规定进行判读
效：质控线（C线）显色检测线（T线）否显色均表示实验结果效
阳性：检测结果显示+（阳性）表示试样中含测组分含量等方法检出限
阴性：检测结果显示（阴性）表示试样中含测组分含量低方法检出限
62 目视判定
通质控线（C线）检测线（T线）颜色深浅进行结果判定
效：质控线（C线）显色检测线（T线）否显色均表示实验结果效
阳性：质控线（C线）显色检测线（T线）出现出现颜色浅质控线（C线）表示试样中含测组分含量高方法检出限判阳性
阴性：质控线（C线）显色检测线（T线）颜色深等质控线（C线）表示试样中含测组分含量低方法检出限判阴性
63 质控实验求
空白试验测定结果应阴性加标质控试验测定结果应阳性
C
T
S
C
S
T
C
T
S
C
T
S
C
T
S
C
T
S
加样孔
效
阴性
阳性
B．检测卡
吸水纸
NC膜
样品垫
效
阴性
阳性
C线
T线
A．试纸条
图1目视判定示意图
7 结
检测结果阳性时应结果进行确证
8 性指标
81 检测限
10μgkg
82 灵敏度
≥95
83 特异性
≥85
84 假阴性率
≤5
85 假阳性率
≤15
注：性指标计算方法参见附录A
9
方法分析步骤结果判定根厂家试剂盒说明书进行应符合优方法规定性指标
方法述试剂试剂盒信息操作步骤方法者提供方便方法时做限定方法者代试剂试剂盒操作步骤前须进行考察应满足方法规定项性指标
方法参标准GB 5009272016食品安全国家标准 食品中苯（a）芘测定
方法试剂盒苯（a）蒽苯（b）荧蒽苯（e）芘苯（j）荧蒽等物质存交叉反应结果判定阳性时应结果进行确证
附录A
定性方法性计算表
表A1性指标计算方法
样品情况a
检测结果b
总数
阳性
阴性
阳性
N11
N12
N1N11+N12
阴性
N21
N22
N2N21+N22
总数
N1N11+N21
N2N12+N22
NN1+N2N1+N2
显著性差异（χ2）
χ2（|N12N21|1）2（N12+N21）度（df）1
灵敏度（p+）
p+N11N1
特异性（p）
pN22N2
假阴性率（pf）
pfN12N1100灵敏度
假阳性率（pf+）
pf+N21N2100特异性
相准确度c
（N11+N22）(N1+N2)
注：
a参方法检验结果者样品中实际公议值结果
b确认方法检验结果灵敏度计算确认结果
N：特定单元结果数第标指行第二标指列例：N11表示第行第列N1表示第行N2表示第二列N12表示第行第二列
C方法检测结果相准确性结果致性分析浓度检测趋势情况综合评价
方法负责起草单位：广东省食品检验
验证单位：成市食品药品检验研究院中国农业科学院油料作物研究
方法起草：熊含鸿王立亚简德威陈思敏雷毅
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食油中苯（a）芘快速检测
胶体金免疫层析法
(KJ201910)
1 范围
方法规定食油中苯（a）芘胶体金免疫层析快速检测方法
方法适食油中苯（a）芘快速测定
2 原理
方法采竞争抑制免疫层析原理样品中苯（a）芘提取胶体金标记特异性抗体结合抑制抗体试纸条检测卡中检测线（T线）抗原结合导致检测线颜色深浅变化通检测线控制线（C线）颜色深浅较样品中苯（a）芘进行定性判定
3 试剂材料
规定外方法试剂均分析纯水GBT 6682规定二级水
31 试剂
311 正烷：色谱纯
312 乙腈：色谱纯
313 二甲基亚砜（DMSO）
314 NaH2PO4•2H2O
315 Na2HPO4•12H2O
316 氯化钠
317 吐温20
318 氢氧化钠溶液（2 molL）：称取80g氢氧化钠水溶解定容1L
319 PBST溶液：称取02965 g NaH2PO4•2H2O29 g Na2HPO4•12H2O876 g氯化钠055 g吐温20水溶解定容1 L
32 参考物质
苯（a）芘参考物质中文名称英文名称CAS登录号分子式相分子质量见表1纯度均≥95
表1 苯（a）芘参考物质中文名称英文名称CAS登录号分子式相分子质量
中文名称
英文名称
CAS登录号
分子式
相分子质量
苯（a）芘
Benzo(a)pyrene
50328
C20H12
25232
注：等溯源物质
33 标准溶液配制
苯（a）芘标准储备液（01 mgmL）：精密称取适量苯（a）芘标准品（32）置10 mL容量瓶中乙腈（312）溶解稀释刻度摇匀制成浓度01 mgmL苯（a）芘标准储备液直接购买苯（a）芘标准储备液0 ℃~5 ℃避光保存备效期1年
34 材料
苯（a）芘胶体金免疫层析试剂盒适基质食油
341金标微孔（含胶体金标记特异性抗体）
342 试纸条检测卡
4 仪器设备
41 移液器：100 µL1 mL5 mL10 mL
42 涡旋混合器
43 离心机：转速≥4000 rmin
44 电子天：感量001 g
45 氮吹仪空气吹干仪（带温度控制）
5 分析步骤
51 试样制备
取适量代表性样品充分混匀
52 试样提取净化脂
称取10 g油样离心中加入5 mL 正烷（311）15 mL DMSO（313）混合均匀漩涡振荡2min然4000 rmin离心2 min弃层正烷层加入5 mL 正烷（311）漩涡振荡30 s然4000 rmin离心30 s弃层正烷层加入10 mL 氢氧化钠溶液（2 molL）（318）15 mL正烷（311）漩涡振荡30s然4000 rmin离心30 s吸取层正烷层15 mL离心4000 rmin离心2 min取全部正烷层氮吹中50℃氮吹空气吹10 min吹干加入200μL DMSO（313）复溶混合均匀测液
53 测定步骤
开试纸筒取出需数量红色反应微孔（取出微孔立盖桶盖防受潮）微孔中加入200 μLPBST溶液加入50 μL测液抽吸5~10次微孔试剂混合均匀室温（20℃~25℃）反应7 min已做标记试纸条插入述红色微孔中样品垫充分进
入样品中计时7 min微孔中取出试纸条弃试纸条端样品垫进行结果判定
54 质控试验
批样品应时进行空白试验加标质控试验
541 空白试验
称取空白试样5253步骤样品法操作
542 加标质控试验
准确称取空白试样（精确001 g）置玻璃试剂瓶中加入定体积苯（a）芘标准储备液（01 mgmL）（331）试样中苯（a）芘浓度10 μgkg5253步骤样品法操作
6 结果判定方式
长时间放置会引起质控线（C线）检测线（T线）颜色变化需规定时间进行结果判定试纸条检测卡图1示结果判定根产品说明书进行
61 读数仪测定结果
通读数仪结果进行判读根厂家仪器规定进行判读
效：质控线（C线）显色检测线（T线）否显色均表示实验结果效
阳性：检测结果显示+（阳性）表示试样中含测组分含量等方法检出限
阴性：检测结果显示（阴性）表示试样中含测组分含量低方法检出限
62 目视判定
通质控线（C线）检测线（T线）颜色深浅进行结果判定
效：质控线（C线）显色检测线（T线）否显色均表示实验结果效
阳性：质控线（C线）显色检测线（T线）出现出现颜色浅质控线（C线）表示试样中含测组分含量高方法检出限判阳性
阴性：质控线（C线）显色检测线（T线）颜色深等质控线（C线）表示试样中含测组分含量低方法检出限判阴性
63 质控实验求
空白试验测定结果应阴性加标质控试验测定结果应阳性
C
T
S
C
S
T
C
T
S
C
T
S
C
T
S
C
T
S
加样孔
效
阴性
阳性
B．检测卡
吸水纸
NC膜
样品垫
效
阴性
阳性
C线
T线
A．试纸条
图1目视判定示意图
7 结
检测结果阳性时应结果进行确证
8 性指标
81 检测限
10μgkg
82 灵敏度
≥95
83 特异性
≥85
84 假阴性率
≤5
85 假阳性率
≤15
注：性指标计算方法参见附录A
9
方法分析步骤结果判定根厂家试剂盒说明书进行应符合优方法规定性指标
方法述试剂试剂盒信息操作步骤方法者提供方便方法时做限定方法者代试剂试剂盒操作步骤前须进行考察应满足方法规定项性指标
方法参标准GB 5009272016食品安全国家标准 食品中苯（a）芘测定
方法试剂盒苯（a）蒽苯（b）荧蒽苯（e）芘苯（j）荧蒽等物质存交叉反应结果判定阳性时应结果进行确证
附录A
定性方法性计算表
表A1性指标计算方法
样品情况a
检测结果b
总数
阳性
阴性
阳性
N11
N12
N1N11+N12
阴性
N21
N22
N2N21+N22
总数
N1N11+N21
N2N12+N22
NN1+N2N1+N2
显著性差异（χ2）
χ2（|N12N21|1）2（N12+N21）度（df）1
灵敏度（p+）
p+N11N1
特异性（p）
pN22N2
假阴性率（pf）
pfN12N1100灵敏度
假阳性率（pf+）
pf+N21N2100特异性
相准确度c
（N11+N22）(N1+N2)
注：
a参方法检验结果者样品中实际公议值结果
b确认方法检验结果灵敏度计算确认结果
N：特定单元结果数第标指行第二标指列例：N11表示第行第列N1表示第行N2表示第二列N12表示第行第二列
C方法检测结果相准确性结果致性分析浓度检测趋势情况综合评价
方法负责起草单位：广东省食品检验
验证单位：成市食品药品检验研究院中国农业科学院油料作物研究
方法起草：熊含鸿王立亚简德威陈思敏雷毅
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